一般情况下，我们都是先种细胞养过夜再转染，这叫forward transfection，即使起始细胞量较低，细胞活性最好。

若转染小rna，可同时进行种板和转染，即细胞悬液和转染复合物混合在一起，放入细胞培养皿中。reverse transfection。但我试过了。细胞活性不如传统。forward transfection好吧，这么多protocol建议添加更多的细胞。

如果是转染dna，通常不建议这样做，或者诚实forward，一天不差。

此外，lipo3000毒性并没有想象的那么小，其他转染试剂，如lipo2000，fugene没有想象的那么大。但是换液还是需要的，最好6-8在一小时内更换液体，否则细胞活性仍会降低。当然，有些强细胞可能不怕，但我还没有遇到过这么强的细胞。至少在我常用的细胞系中测试的几种感染试剂使用一定量的流式。即使在感染6小时后更换液体，第二天也会有大约30%的细胞死亡。