pi它不能穿透细胞膜，被排除在活细胞之外，但可以通过受损的细胞膜染色核染色。利用这一特性，通常是calcein-am、hoechst 33258或 hoechst 33342等活细胞荧光探针同时染色和识别活细胞和死细胞，用于细胞凋亡的研究。它也可用作多种荧光染色的复染剂，包括直接或间接的荧光抗体检测，mrna原位杂交、细胞结构特异性荧光探针检测和组织染色。pi细胞周期检测也可以单独染色。

本品溶于水pi 储存液浓度为1mg/ml，用适当的缓冲液稀释工作液。

产品简介

英文名：2,7-diamino-9-phenyl-10 ( ** thylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.

cas号：25535-16-4

分子式：c27h34i2n4

分子量：668.4

外观：暗红色结晶

纯度：≥95% by hplc

溶解:溶于水(1 mg/ml）

荧光光谱 （fluorescence spectral）：水溶液，pi的ex/em= 493/636 nm；pi-核酸的ex/em= 535/617 nm；氙气灯、泵弧灯或488 nm氩离子激光刺激。通常，使用流式细胞仪fl2通道检测。

使用方法

1. 贴壁细胞复染步骤(荧光显微镜检测)

1） 样本准备:根据自己的样本选择合适的步骤来固定细胞。pi染色通常在其他染色完成后进行。pi复染需要细胞透化。

2） rnase酶处理：如果样品采用多聚甲醛、甲醛或戊二醛固定，则需要进行rnase处理。如果样品用甲醇/醋酸或丙酮固定，通常不需要此操作。a，于2×ssc (0.3 m nacl,0.03 m sodium citrate,ph 7.0)溶液平衡样本；b，把这个产品放在含100 μg/ml dnase-free rnase的2×ssc溶液中37°c孵育20 min；c，用2×ssc溶液清洗样品3次，每次1 min。

3） 复染：a，于2×ssc (0.3 m nacl,0.03 m sodium citrate,ph 7.0)溶液平衡样本；b，直接用2×ssc稀释1 mg/ml(1.5 mm)pi储存液 1:3000，500 nm的pi工作液。通常加300 μl染料足以用来制作覆盖玻片的细胞。1-5 min。c，2×ssc清洗几次，流出多余的液体，加入抗淬灭剂密封(yeasen,cat#36308es08)。d，选择合适的荧光显微镜滤片进行观察。

2. 悬浮细胞复染步骤(流式细胞仪检测)

1）样本准备：根据自己的样本选择合适的步骤来固定细胞。或使用以下步骤：

a. 收集细胞，密度约2×105~1×106。离心后吸去上清，轻弹管壁上剩余的液体重悬细胞。加入1 ml常温存放的pbs；

b. 将所有重悬细胞转移到4 ml于-20oc预冷无水乙醇在高速涡旋混合的同时，用枪缓慢向乙醇中添加细胞悬液。-20oc乙醇中固定5-15 min。

c. 离心收集细胞，去除乙醇。弹松细胞后加入轻弹管壁5ml室温的pbs。允许细胞水化15 min；

2）复染

a. 用染色液(100 mm tris,ph 7.4,150 mm nacl,1 mm cacl2 ,0.5 mm mgcl2 ,0.1% nonidet? p-40）稀释1 mg/ml（1.5 mm）pi存储液 1:500，3 μm的pi工作液。1 ml的pi染色液足以检测每个细胞样本。注：工作液的浓度可根据自己的实验系统或直接调整pbs，hbss等待缓冲液直接稀释pi储存液到所需浓度。

b. 样品制备的最后一步是离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁弹松细胞，加入1 ml的pi染色工作液。室温孵化15 min之后，流式细胞仪进行细胞分析。如果用显微镜观察，则需要在新鲜缓冲液中去除和重新悬浮细胞。吸收1滴悬浮液到载玻璃，盖上玻璃后观察。

3. 染色质fish复染步骤

1）样品准备：根据标准步骤制备样品。染前的最后一步是用去离子水清洗样品，以去除玻璃上残留的缓冲液。室温干燥。这一步有助于减少非特异性背景染色。

2）复染

a. 工作液制备：使用pbs1 直接稀释缓冲液mg/ml(1.5 mm)的pi储存液1:10001.5 μm的pi染色工作液。滴加300 μl工作液直接到样本。必要时，将新鲜制备的工作液添加到工作液中rnase a(最终浓度:10 μg/ml）。在载玻片上均匀分布染液的塑料盖玻片。在室温避光条件下孵化样品30 min；如果加入rnase则37oc孵育。

特殊染色及酶组织化学染色及诊断

宫颈脱落细胞的组织细胞学特殊染色液

特殊染色液

宫颈癌染色液

巴氏染色液

染色剂

革兰氏染色液试剂盒

台盼蓝染色液

hoechst 33342染色液

hoechst 33342

hoechst 33258染色液

hoechst 33258

pi染色液

化丙啶

dapi染色液

4',6-联脒-2-苯基吲哚

细胞核染色

羧基-2',7'-二氯二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯

5（6）-羧基-2',7'-二氯荧光素二乙酸酯

5（6）-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯

5（6）-羧基荧光素二乙酸酯

二乙酸荧光素

乙酰甲酯钙黄绿素

线粒体染色

罗丹明b高氯酸盐

细胞内脂和蛋白质染色

尼罗红

did细胞膜染色

did三氟甲磺酸盐（5mm dmso溶液）

did三氟甲磺酸盐

did 高氯酸盐

dii细胞膜染色

dii三氟甲磺酸盐

dii高氯酸盐